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    催產素檢測試劑盒(酶聯免疫法)ELISA操作原理

    發布時間:2021-11-09   點擊次數:295次

    催產素檢測試劑盒(酶聯免疫法)ELISA操作原理

    德國進口DRG

    【檢測原理】 

    在執行此測定之前,請閱讀完整的試劑盒說明書。提供催產素標準品以生成測定的標準曲線,所有樣品應 從標準曲線中讀出。 將標準品或稀釋的樣品加入到包被有抗體的微孔板中,以捕獲兔抗體。將催產素-過氧化物酶聯物添加到標 準品和樣品的孔中。通過向每個孔中添加催產素多克隆抗體來啟動結合反應。在 4°C 孵育過夜后,洗滌微 孔并添加提供的底物。底物與結合的催產素-過氧化物酶結合物反應。孵育 30 分鐘后,停止反應,并在能 夠測量 450 nm 波長的酶標儀中檢測所產生顏色的強度。 使用大多數酶標儀提供的軟件對樣品的稀釋液進行適當校正后,可以計算出樣品中催產素的濃度。

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    所需但未提供的其他材料

    1. 蒸餾水或去離子水 2. 聚丙烯或玻璃管 3. Speedvac /離心濃縮器或 N 2氣體和瓦斯集合管進行蒸發 4. 帶有一次性吸頭的移液器,例如 Eppendorf 移液槍,可精確分配 25 µL,50 µL 100 µL 5. 微孔板振蕩器 6. 450 nm 酶標儀 7. 四參數對數曲線(4PLC)擬合的軟件 

    【儲存條件】 試劑盒在 4°C 下可保存至效期結束。 

    【樣本類型】 該測定方法已經過血清,EDTA 和肝素血漿,唾液,澄清牛奶和組織培養樣品的驗證。 使用前,應將含有可見顆粒物的樣品離心。

    催產素在所有物種中都是相同的,我們希望該試劑盒可以檢測人類以外來源的催產素。 由于與魚神經葉激素和中催產素的交叉反應性,該試劑盒還應能夠測量鳥類,魚類,兩棲動物和爬行動物 中的魚神經葉激素。最終用戶應評估其他被測樣品中催產素的回收率。

    【樣品制備】 血清和血漿樣本 在試劑盒中檢測之前,應使用提供的提取液或固相 C18 柱提取方案(應要求提供肽/蛋白質提取方案)提 取血清和血漿樣品。 

    使用提取液的方案: 1. 1 份樣品與 1.5 份提取液混合。

    2. 然后在室溫下渦旋振蕩 90 分鐘。

    3. 4°C 下以 1660 x g 離心 20 分鐘。 

    4. 將上清液轉移到透明管中。 

    5. 將上清液在 37℃下干燥濃縮。 

    6. 250 µL 分析緩沖液復溶樣品。

    唾液樣本 唾液樣本應使用血清和血漿樣本所述的提取試劑進行提取。唾液應與 Sarstedt 唾液采集管一起收集,提取, 干燥并在 250 µL 的分析緩沖液中重新配制。 

    牛奶樣本 牛奶樣品應通過以 10,000×g 離心 15 分鐘來澄清。刺穿頂部脂肪層并收集上清液。重復離心和收集兩次。 然后,在用于測定之前,必須使用提供的分析緩沖液將收集的上清液稀釋≥1:10。 澄清的牛奶樣品,即上清液,可以在-20℃下保存直至需要。

    在制備后的 2 小時內使用所有樣品

    【試劑準備】 使所有試劑平衡至室溫 30 分鐘。在將其運用于試劑盒之前,請確保所有樣品均已達到室溫并已適當稀釋。 

    分析緩沖液 將一份濃縮液添加到四份去離子水中來稀釋分析緩沖液濃縮液 15。稀釋后,可在 4°C 下穩定 3 個月。 洗滌緩沖液 將一部分濃縮液添加到 19 份去離子水中來稀釋洗滌緩沖液濃縮液 1:20。稀釋后,在室溫下穩定 3 個月。

    標準品制備 將試管標記為#1 至#8。 吸取 450 µL 分析緩沖液至#1 試管中,然后吸取 300 µL 至其余試管中。 催產素原液包含有機溶劑。將移液器吸頭預沖洗幾次,以確保準確遞送。 小心地將 50 µL 催產素原液加入 1 號試管中,并完全渦旋。然后再加入 200 µL 1 號管液至 2 號試管中并完 全渦旋。重復#3 至#8 試管的系列稀釋。 試管 1 8 中催產素的濃度將為 10,000、4,000、1,600、640、256、102.4、40.96 16.38 pg / mL。


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